我公司成立至今七年之久,在前面的內(nèi)容中我司為大家介紹了許多相關(guān)操作方法、操作技巧、經(jīng)驗總結(jié)等,有愈多用戶反應(yīng)從中學(xué)到了不少知識。在今天的內(nèi)容中,上海恒遠生物為大家重點講談ELISA實驗檢測方案。 一、雙抗體夾心法 1.測抗原 ① 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。 ② 加受檢標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。 ③ 加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。 ④ 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。 2.測抗體 反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測相應(yīng)的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同,尋找合適的標(biāo)記方法。