3.2號上午我司接到來自福建農(nóng)林大學老師的:我想提取植物葉片總蛋白進行SDS-PAGE分析,請問有什么簡便的方法嗎?
我司技術(shù)通過與客戶深入溝通了解后給予客戶以下兩條解答方法:
一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法
1、根據(jù)樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據(jù)材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。
2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。
3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清液,樣品制備完成。
蛋白質(zhì)提取液:300ml1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g。這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳!
二、植物組織蛋白質(zhì)提取方法( 氯醋酸—丙酮沉淀法)
1、在液氮中研磨葉片
2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下放置一晚,然后離心(4℃8000rpm以上1小時)棄上清。
3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時),然后真空干燥沉淀,備用。
4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm以上1小時或更長時間以沒有沉淀為標準),可臨時保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆?。藥品:提取液:?0%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中(終體積為5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。這種方法針對雙向電泳,雜質(zhì)少,離子濃度小的特點!當然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少!