近期恒遠(yuǎn)經(jīng)常接到客戶的:同一條件下,除了測的指標(biāo)不一樣,為什么有張膜顯影,有張未顯影???
上海恒遠(yuǎn)技術(shù)分析:在同一條件下,如果一張膜顯影,一張膜未顯影,可以逐一查找原因:
1、你是否兩張膜上都設(shè)有陽性對照?如果有,一張膜有信號,一張沒信號,可能是操作過程中有問題(可能原因是(1)、你結(jié)合底物會不會有問題,即沒有充分結(jié)合好,或者結(jié)合時間太短,(2)、你要確定兩張膜都是用新的底物反應(yīng)液,(3)、就是沒有信號的膜會不會壓片時間太短,如果使用儀器掃片就不存在這種問題,)所以原因比較多,你只能逐一排查。
2、如果沒有設(shè)對照,這個問題就更復(fù)雜,而且解決起來也不科學(xué)。同時,要控制兩個膜條件*一樣是很困難的。即使你是同時做的兩個,那一定有一個先上樣,一個后上樣,而且你跑膠的時候會發(fā)現(xiàn),兩塊膠上的條帶速度肯定是不一樣的,轉(zhuǎn)膜兩個膜放的位置也肯定不一樣,等等,也許這些小問題都不能導(dǎo)致你壓片不出條帶,我只是想說,兩個條件不可能*相同,western blot實驗就是重復(fù)性比較差,所以一個出一個不出,這樣是正常的。