鞭毛染色液實(shí)驗(yàn)過程中遇到的問題及方法
更新時(shí)間:2013-08-08 點(diǎn)擊次數(shù):1349
玻片處理:將玻片用洗衣粉煮沸10分鐘,水洗,再用清潔液浸泡,加溫10分鐘,水洗,再放入95%酒精脫脂,同時(shí)取出涼干,可制成涂片.
染色液的配制:
20%的鞣酸溶液(加溫溶解)2毫升
鉀明礬飽和液2毫升
石碳酸飽和液5毫升
10%堿性復(fù)紅無水乙醇溶液1.5毫升
將上述各液混合后放置2-3日,過濾后備用,此液使用不得超大型過5周.
染色步驟:將細(xì)菌接種在瓊脂平板上,培養(yǎng)8-18小時(shí),(35-37℃),用無水乙醇浸泡過的而且干燥的新玻片加一滴無菌DW,用接種環(huán)挑取菌落,置DW液面上,然后自然干燥.滴加染色液染1-2分鐘,水洗干后鏡檢.
結(jié)果:鞭毛染成紅色.
在實(shí)際鞭毛染色液膠體金實(shí)驗(yàn)中遇到的問題及回答:
1)超過了判讀時(shí)間結(jié)果還準(zhǔn)確嗎?
答:結(jié)果不準(zhǔn)確,應(yīng)按照說明書規(guī)定的時(shí)間判讀。如果到判讀時(shí)間為止,結(jié)果為陰性,判讀時(shí)間以后,出現(xiàn)淡淡的線條,可能是有色標(biāo)記物持續(xù)釋放造成的,但是這種結(jié)果是無效的。
2)使用冰箱保存的標(biāo)本和產(chǎn)品,應(yīng)該注意什么?
答:若標(biāo)本、試劑、緩沖液冷藏后,檢測(cè)前應(yīng)把冷藏過包裝完好的檢測(cè)試劑、緩沖液放置空氣中復(fù)溫,冷藏或冷凍的標(biāo)本檢測(cè)前也應(yīng)復(fù)溫。如果沒有與室溫平衡即開始檢測(cè),空氣中的水分遇冷凝集在沒有復(fù)溫的試劑上,導(dǎo)致產(chǎn)品受潮,可能影響測(cè)試結(jié)果。如果冰箱濕度較高,不建議開封過的筒裝產(chǎn)品在冰箱內(nèi)保存。
3)樣品移行速度特別慢或無樣本跑動(dòng)現(xiàn)象(在反應(yīng)窗內(nèi)不見有液體在膜上流動(dòng))
答:加入的標(biāo)本量或全血加稀釋液的量不夠:重新試驗(yàn)。
包裝袋破損或試劑失效:重新試驗(yàn)。
從冷環(huán)境取出后沒復(fù)溫:重新試驗(yàn)。
診斷試劑裝配不當(dāng):與供應(yīng)商。
4)在反應(yīng)窗內(nèi)見到紅色豎線
答:當(dāng)樣本在膜上流動(dòng)時(shí)可能發(fā)生:該情況不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果,但保證背景清晰的情況下在規(guī)定時(shí)間內(nèi)讀取結(jié)果。
可能使用了已溶血樣本:用新鮮標(biāo)本重新測(cè)試。
5)規(guī)定的結(jié)果讀取時(shí)間時(shí)未見 C線?
答:加入的樣本量不夠:重新測(cè)試,按說明書要求加入足夠的樣本量。
加入的樣本量太多,導(dǎo)致產(chǎn)品流動(dòng)不正常:按照說明書要求滴加樣本量。
樣本不流動(dòng),試劑有問題:與供貨商。
用血清血漿試劑檢測(cè)全血:用對(duì)應(yīng)的標(biāo)本檢測(cè)。
6)檢測(cè)后出現(xiàn)假陽性結(jié)果
答:血清/血漿樣本中含有特殊干擾物質(zhì):用另外的方法確診檢測(cè)結(jié)果。
在超過規(guī)定時(shí)間后讀取結(jié)果:不要在說明書規(guī)定讀數(shù)時(shí)間后讀取檢測(cè)結(jié)果。
7)檢測(cè)后出現(xiàn)假陰性結(jié)果
答:樣本中被檢樣本濃度低于檢測(cè)閾值:用其它檢測(cè)方法確認(rèn)。
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