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            恒遠(yuǎn)生物|雞免疫球蛋白M(IgM)ELISA實(shí)驗(yàn)說明
            更新時間:2024-06-07 點(diǎn)擊次數(shù):228

            檢測范圍:

             

            150ng/ml - 5000ng/ml

             

            使用目的:

             

            本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白M(IgM)含量。

             

            實(shí)驗(yàn)原理

             

            本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中雞免疫球蛋白M(IgM)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白M(IgM),再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白M(IgM)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞免疫球蛋白M(IgM)濃度。

             

            標(biāo)本要求

            1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

            2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

             

            操作步驟

            1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

            4800ng/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            2400ng/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            1200ng/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            600ng/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            300ng/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

            3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

            4.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

            5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

            6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

            7.溫育:操作同3。

            8.洗滌:操作同5。

            9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

            10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

            測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

             

            完整版說明書可咨詢我司業(yè)務(wù)員。上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是國內(nèi)ELISA試劑盒優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商,代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進(jìn)口/國產(chǎn)ELISA試劑盒,專業(yè)供應(yīng)科研實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基,抗體,動物血清血漿,標(biāo)準(zhǔn)品對照品,化學(xué)試劑,酶聯(lián)免疫試劑盒,白介素試劑盒,金標(biāo)檢測試劑盒,微生物,蛋白質(zhì),ELISA種屬涵蓋廣,憑借多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn),完善的售后服務(wù),高質(zhì)量的產(chǎn)品。如果您有實(shí)驗(yàn)上的問題歡迎來咨詢。

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