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            技術(shù)文章

            Technical articles
            人唾液淀粉酶(AMY)說(shuō)明書(shū)
            更新時(shí)間:2011-12-20 點(diǎn)擊次數(shù):2426

            人唾液淀粉酶(AMY)酶聯(lián)免疫分析
            試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
            本試劑盒僅供研究使用。
            檢測(cè)范圍:                                                                                                                  96T
            15U/L - 400U/L
            使用目的:
            本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中唾液淀粉酶(AMY)含量。
            實(shí)驗(yàn)原理
            本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人唾液淀粉酶(AMY)水平。用純化的人唾液淀粉
            酶(AMY)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入唾液淀粉酶(AMY),
            再與 HRP 標(biāo)記的唾液淀粉酶(AMY)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*
            洗滌后加底物 TMB顯色。TMB 在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui
            終的黃色。顏色的深淺和樣品中的唾液淀粉酶(AMY)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下
            測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人唾液淀粉酶(AMY)濃度。
            試劑盒組成
            1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
            2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(800U/L) 0.5ml×1 瓶
            3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
            4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份
            5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張  
            6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
            標(biāo)本要求
            1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
            馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
            2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
            操作步驟
            1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
            釋。
            400U/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            200U/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            100U/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            50U/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            25U/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
            待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
            量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
            3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    
            4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
            重復(fù) 5次,拍干。
            6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
            7. 溫育:操作同 3。
            8. 洗滌:操作同 5。
            9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
            15 分鐘.
            10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
            11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
            液后 15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
            操作程序總結(jié):
            計(jì)算
            以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
            OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
            準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
            注意事項(xiàng)
            1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
            用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
            2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
            3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
            控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
            4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值
            大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)
            算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
            5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
            6.底物請(qǐng)避光保存。
            7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
            8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
            9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
            10.  如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
            保存條件及有效期
            1.試劑盒保存:;2-8℃。
            2.有效期:6個(gè)月

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