今天上海恒遠(yuǎn)為大家講解ELISA實(shí)驗(yàn)技巧中的空白孔對照。
ELISA試劑盒ELISA空白對照有幾種:
1. 空氣空白水空白:一般是用于儀器調(diào)零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。
2.底物空白:一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高,同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值(只加底物和終止液)
3. 酶空白:一般在2步法實(shí)驗(yàn)中使用,主要是看酶是否和板有非特異性結(jié)合的,一般不做這個(gè) 。
ELISA空白孔一般設(shè)一個(gè),這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽性標(biāo)準(zhǔn)品比較好是設(shè)2個(gè)復(fù)孔,雖然有點(diǎn)浪費(fèi),但為了確保實(shí)驗(yàn)的可靠性,我認(rèn)為還是很有必要的。ELISA空白孔加什么?一般兩個(gè)做法,看個(gè)人習(xí)慣或者說看你們實(shí)驗(yàn)室的習(xí)慣:
1,什么都不加,然后那個(gè)孔按照操作流程來做,這個(gè)說法的根據(jù)就是空白,也就是什么都沒有。
2,加樣本稀釋液,然后按照操作流程來做。這個(gè)做法的根據(jù)就是只要不含陽性物質(zhì)就算是空白的,加入樣本稀釋液的目的是為了使這個(gè)孔除了在沒有陽性物質(zhì)上其他的都與其他孔一致。
怎麼控制顯色時(shí)間?
顯色時(shí)間要通過預(yù)實(shí)驗(yàn)找到所測所有sample的顯色OD在0.1到2.0的有效range間,我用過OPD solution,一般incubation for 15min at RT,測一次然后立即加入stop solution 在測一次。