根據(jù)我公司進(jìn)口ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)部多年的經(jīng)驗(yàn)以及客戶們的咨詢問題總結(jié),整理分析出了幾個(gè)需要嚴(yán)格注意的方面,實(shí)驗(yàn)者們隨上海恒遠(yuǎn)來看一看吧(供參考)。
1. 讀板時(shí)板底不清潔:難免洗板后板底有水漬,這也可能導(dǎo)致讀數(shù)不準(zhǔn)。
2. 溫育溫度的選擇
說明書表明的溫度可有兩種(①37℃下1小時(shí)、②43℃下45分鐘),從免疫測(cè)定的抗原抗體反應(yīng)的本質(zhì)來看,在較低的溫度下反應(yīng)較長(zhǎng)的時(shí)間zui為*。上海恒遠(yuǎn)生物建議在臨床ELISA測(cè)定中盡量使用較低溫育溫度較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件。
3. 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉:曾用洗瓶直接沖洗板。后來雖然也用槍逐孔洗板,但對(duì)此注意不夠。
4. 加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡:終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。
5. 加樣板過多、加樣速度慢,造成各孔反應(yīng)時(shí)間不均一:但溫度高時(shí),加樣時(shí)間過長(zhǎng)將導(dǎo)致各孔時(shí)間的反應(yīng)時(shí)間不均一;還使得孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。如果連續(xù)做好幾塊板,則有可能使某些板不能及時(shí)洗板,也導(dǎo)致孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)。
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