今日主題:ELISA成功的原因重在點(diǎn)子上
更新時間:2016-09-27 點(diǎn)擊次數(shù):1239
ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因有哪些?您的實(shí)驗(yàn)思路是怎樣的?ELISA試劑盒作為上海恒遠(yuǎn)主營且熱銷的產(chǎn)品之一,ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)問題必然是售后服務(wù)中的一大焦點(diǎn)。日前上午9時,我公司展開2016酶聯(lián)免疫技術(shù)交流會,會議主題也正是我今日資訊主題:ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因重在“點(diǎn)子”上。
會中,我司技術(shù)總監(jiān)表示:從標(biāo)本的采集到實(shí)驗(yàn)操作步驟完畢,每一個流程都是影響實(shí)驗(yàn)的因素。當(dāng)然,這是在試劑盒質(zhì)量保證且正確保存的條件下。為什么說ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因重在“點(diǎn)子”上?只要每一步流程都能夠達(dá)到正確的“點(diǎn)”上,那么您定能夠做出的實(shí)驗(yàn)。
一、檢測標(biāo)本的收集:
①收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。
②血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血,高血脂標(biāo)本。
③標(biāo)本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
④標(biāo)本收集后若不及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-70℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融,3-6月內(nèi)檢測。
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進(jìn)行。
檢測的樣本,及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
二、不斷學(xué)習(xí)ELISA操作技巧:
1.操作前應(yīng)對實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。
2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說明書一致,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。
3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大,洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流,造成孔問污染,導(dǎo)致假陰性或假陽性。
4.要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn),造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯誤。
5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng),顯色液量不能過多,以免顯色過強(qiáng)。
三、操作指南:
操作指南:固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果
四、OD值的范圍:
在ELISAzui后步驟中OD值的范圍也是有一定講究的,不容小覷。說到OD值范圍,我公司業(yè)務(wù)員在售后問題的處理過程中也常會有客戶咨詢其范圍是多少。其實(shí)是不一定的,我們以AβELISA為例,2以上就會偏飽和,變化不容易做出來,所以一般把model組控制在0.8-1.5,而control組的話基本跟空白差不多,不到0.1。
所以,一般情況下我們會建議先做個標(biāo)曲以及樣品的梯度稀釋,然后選擇在標(biāo)曲中間位置的樣品稀釋度作為以后的參照稀釋度。
同時,也與使用的detector有關(guān),detector有自己的檢測范圍和線性范圍。如果實(shí)驗(yàn)室使用的儀器,說明書上說檢測范圍是0~4,線性范圍是0~3,但我們自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示的線性范圍是0~2OD。如果只檢測空白的沒有經(jīng)過處理的Elisa孔,大致在0左右。
上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒提供專業(yè)的全程技術(shù)指導(dǎo)服務(wù)及免費(fèi)代檢測服務(wù),助您的實(shí)驗(yàn)一臂之力!另有好消息:黃金十月,BIM試劑盒將與各位親密互動,全場享5折優(yōu)惠,歡迎您關(guān)注我司*活動動態(tài)或。